原文作者– Helen Whitby, PhD

翻译作者- Kevin Zhao, M.S., MBA

缓冲溶液是指由弱酸及其共轭碱（或弱碱及其共轭酸）所组成的缓冲对配制的，且能够在加入少量强酸或强碱时，可以有效减缓pH值改变的水溶液。缓冲溶液能帮助维持分析方法的稳定，而不会因为微弱的环境改变的情况下而造成分析结果的改变。

缓冲溶液是被用来维持pH值的稳定。它们是通过维持弱酸及其共轭碱的平衡从而防止了pH值的改变。

当配制缓冲溶液时

你应该遵循以下几个原则

HPLC缓冲液通常用于控制在液相色谱分析中所不希望出现的二次相互作用。此外，缓冲液也被用来工作分析物的电离状态，以确保分析物不会同时出现一个以上的电离状态。

化合物的pKa值代表此化合物的50%离子化和50%中性时的pH值。如果在此pH值下分析此化合物，你会看到分裂峰的出现或者不稳定的保留时间。因此，我们建议所有的分析方法的pH值都应该控制在目标分析化合物的pKa值正负两个pH单位以上。

当配制等度流动相的时候，我们

还需要考虑以下几个因素来确保方法的稳定

以下的这个实验例子展示了当流动相

用以下不同的方式来混合时，

峰保留时间可能出现的改变

缓冲液的浓度也是很重要的。我们一般认为，10mM以下的浓度不足够提供可以控制化合物硅醇活性或者电离状态所需要的缓冲能力，因此10mM是反相或者HILIC色谱模式下的最低有效浓度。对于其他色谱模式，如体积排阻色谱就需要更高的缓冲液浓度，使用超过100mM浓度的缓冲液在体积排阻色谱法中并不罕见。

缓冲液的浓度必须非常精确地平衡好，以确保在所有的条件下都能达到完全溶解。在反相条件下，如果方法条件是包含了高比例有机相的话（例如跨度很大的梯度），则很有可能需要控制缓冲液的浓度，以确保不会出现缓冲盐的析出。

当开发一个可靠稳定的HPLC方法时，流动相的贡献跟色谱柱固定相的选择性一样重要，另外流动相的选择与配制跟色谱柱固定相批次间的质检也是一样重要的。