血浆中儿茶酚胺的LC-MS/MS分析方法
检测背景
儿茶酚胺是一种含有儿茶酚和胺基的神经类物质。儿茶酚胺（CA）包括去甲肾上腺素（NA或NE）、肾上腺素(Ad或E)和多巴胺（DA）及它们的衍生物。儿茶酚胺类物质在体内调节基本生理功能，传递生理信号，是正常生理过程中重要的信号介质，同时在病理过程中也出现其含量的相应变化。临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤和神经母细胞瘤等内分泌相关疾病。血浆里儿茶酚胺水平的变化显示不同的病态情形，因此也被用于多种临床应用检测项目中。本次应用，我们将向您介绍血浆中儿茶酚胺的LC-MS/MS分析方法。
样品制备
固相萃取（SPE）
小柱：Cleanert® PWCX
货号：WC00201-MW
活化：先用 200 μL 甲醇活化，再用 200 μL 50 mM 乙酸铵活化，控制流速 3-5s/滴。
上样：把预处理的样品分两次上样，每次 500 μL，施加正压全部压下，控制流速 3-5s/滴。（500 μL 人血混合液+10 μL 0.1%甲酸乙腈 +10 μL 内标+500 μL 50 mM 醋酸铵溶液，混匀。）
淋洗 1：向每孔加入500 μL乙腈，正压压下，控制流速 3-5s/滴，弃去。
淋洗 2：向每孔加入500 μL水，正压压下，控制流速 3-5s/滴，弃去，然后施加 0.5MPa 压力压 1min。（不同的正压装置压力强度不同，压力的设定会随之改变，唯一不变的是尽可能 的保证柱床中不能有太多水分）
洗脱：向每孔中加入100 μL 2%FA乙腈，正压压下，控制流速3-5s/滴，收集。
氮吹：将收集的洗脱液在室温下氮吹干
复溶：用60 μL流动相复溶，涡旋30s，盖上硅胶垫进样检测
LC-MS/MS条件
色谱柱：儿茶酚胺专用柱 3 µm
规格：2.1 × 100 mm
货号：VSI931002-A
流动相：
A：0.1%甲酸-10mM甲酸铵水；
B：0.1%甲酸-10%水-10mM甲酸铵-90%乙腈
梯度：
流速：0.6mL/min
柱温：40 ℃
进样量：10uL
图1.500pg/ml 多巴胺标准品出峰谱图
图2.1ng/ml 去甲肾上腺素标准品出峰谱图
图3.500pg/ml 肾上腺素标准品出峰谱图
图4.500pg/ml 去甲变肾上腺素标准品出峰谱图
图5.50pg/ml 甲氧酪胺标准品出峰谱图
图6.50pg/ml 变肾上腺素标准品出峰谱图
实验结果
血浆样品加标回收率实验结果（添加水平 pg/mL）
